“雌雄大老千”是一套别开生面的二十集时装剧，它展示了九十年代香港社会功利的一面，但同时，亦对人的爱情、友情、亲情予以肯定。 柯平坦〈张兆辉〉本来是一个小职员，但被自小相识的好友叶国基〈杨得时〉所利用，身陷牢狱，令坦一生起了转变。 坦在狱中认识了梁亚鸡〈李显明〉二人遂成了好友，坦出狱后逼于生活，跟着鸡成了一个小老千，四处招摇撞骗，一次二人无意遇上了大老千吕清为〈王伟〉，被为看中并收坦为徒。 坦自此便跟着为晋身成一个大老千，但一次误会，令坦与为打赌，二人打睹谁先骗到橡胶皇后阮希灵〈周海媚〉，谁知到头来，灵才是最大的老千，其后更惺惺相惜，便合作起来，坦在灵与为的教导下，成了一个专偷女人心的情场老千，而坦、灵在这段期间，亦互生了情愫。 当坦正对富家女方敏儿〈陈梅馨〉行骗之时，发觉儿对自己用情极深，于是打算收手不干，此时基却竟以大企业家的身份回到香港，基还再利用坦对自己的信任来帮助这行商业大骗案。 坦在灵、儿及身边好友相继被基陷害之后，才如梦初醒、决心向基进行大报复………
本剧通过十三个案例，讲述了香港一班正义的律师在法庭内唇枪舌战，在庭外经历个人的种种感情考验的经历。一日，阿超伙同别人向阿权寻仇，当街斩杀阿权，警察周文彬（骆应钧 饰）恰巧在场，马上拘捕了阿超。检察官丁柔（陈秀雯 饰）将这件案交给了下属新人在春（欧阳震华 饰）负责，在春其实一直暗暗爱慕者自己的上司，但丁柔早已心有所属，对他更是若即若离；另一方面，刚刚又凭借其出色的经验与技巧帮一谋杀疑犯洗脱罪名的御用大律师颂云（苏杏璇 饰）接了阿超的案件，成为他的辩护律师。颂云为了锻炼女儿承宙（刘美娟 饰），让她全权负责阿超大案件，自己从旁指点。承宙在母亲的指点和大哥承宇（陶大宇 饰）的帮助下到处搜集证据，一场唇枪舌战即将上演！
在一貧窮村落，有一位口才了得的狀師戴亞斗（鄭丹瑞）。村民每有任何冤情申訴，均禮聘他作其狀師， 斗因而聲名大噪。斗家乃狀師世家，種下不少冤孽，其母恐斗絕後，遂為他娶–童養媳梅群娥（崔加寶）。然而，斗卻對縣官商君綿（黃新）之女商湘（蔡少芬）情有獨鍾。 後綿之親戚因貪污而被抄家，綿亦被牽連其中。斗與湘赴京營救綿，欲請著名狀師卓一言（曾偉權）相助，卻被拒於門外。幾經波折，斗終為綿洗脫罪名，並獲慈禧太后御賜金牙，成為金牙大狀。 不久，斗認識名妓伊靜（鍾淑慧），靜對斗生愛意，惜斗不為所動。及後，靜離奇被殺，斗亦被捲入案中。追查之下，斗發現真兇竟是好友倪鐵樑（林嘉華）。究竟斗能否為自己洗脫罪名？真兇又會否被繩之於法？
故事开端，程家俊﹝万梓良﹞乃一建筑公司工程师，因工作关系与太子爷江世文结怨，连累女友孙洁明﹝麦翠娴﹞被害，俊报复导致文入狱。文含恨在心买凶杀俊，却误杀其母，俊与控官叶晓琳﹝陈敏儿﹞合力指控文失败，文获释，却遭程家勇﹝林嘉华﹞所枪杀。 俊转投警界，与莫兆康﹝吕良伟﹞结成知交，及后康为取得家产变得不择手段，误杀岑碧舒﹝陈美琪﹞，……
为免涉足江湖恩怨情仇，玉云龙 (萧正楠饰) 与姐玉娇凤 (简慕华饰) 安份守己经营客栈生意，谁料云龙为重夺旧爱艾冰冰 (汤洛雯饰) 芳心毅然参加新晋英雄大赛，因而牵涉揭发东厂黑幕，被东厂的仇不群 (黄智贤饰) 收入监牢，娇凤救弟心切，暗中放风指客栈有隐世宝物，不群不单立即释放云龙，更派出左右手仇在心 (陈凯琳饰) 跟随云龙到客栈收取情报，此事亦引来各路隐世英雄一一涌现，各施奇谋，期间令一直寻找杀害双亲的在心发现真相，倒戈相向对付不群之馀，更与云龙产生感情，决心一同改革武林，令本已奄奄一息的武林再现生气，但二人却陷入本是慈悲老人任我飞 (姜大卫饰) 筹谋已久的复仇大计……
本剧向人们讲述了四个不同时代的女子的爱情及婚姻，反映出爱情、婚姻关系随着时代的变化而变迁的过程。 清朝末年，千金小姐魏瑜凤（佘诗曼 饰）知书识礼，与家中厨师余赐（马德钟 饰）自小青梅竹马一起长大，两人暗生情愫。可惜后来魏家衰落，瑜凤被迫嫁给了太史家的二世祖汪毓麟。毓麟挥霍无度，很快将家业败光。这时余赐已经拜了御厨为师，学习厨艺，他想带着瑜凤离开重新开始。瑜凤不忍看见汪家就此衰落，于是将余赐送给自己的玉筷子卖了，开办了一家小食肆——凤凰楼。后来瑜凤和余赐双双在事故中身亡。凤凰楼见证了两人未结果的爱情。 五四时期，瑜凤的女儿子君（佘诗曼 饰）喜欢上了已经有了未婚妻的青年教师李吉祥（马德钟 饰）。子君不想像母亲那样只留一段未结果的爱情就过世，于是一直在向吉祥表白自己的心迹。吉祥终于被打动了，两人一起私奔到了天津。可惜，随后两人分手了，吉祥投身革命，而子君则回家打理凤凰楼。最后，两人发现仍深爱对方，可惜吉祥不得不再次离开革命，留下了子君母女。 ……
慢活干探丁志摩带领的“杂项调查小队”(ME)，专门处理琐碎案件，与世无争。直至急进派“大肚婆”龙丽莎加入，争住做队中“尸王”，从此改写小队的命运。丽莎破案“无底线”，跟志摩的作风大相径庭，两人在查案过程中一直互不咬弦。车奕晨为面子当差，却因失误致同袍伤残，自此散漫成性。他在ME却重遇旧情人谷芷晴，并与警队小鲜肉李俊基，展开三角关系。一次行动，揭露志摩多年秘密，加上奕晨之失误，令丽莎陷于生死关头……
1 单元个案：惩教署发现监狱内有犯人不断收到违禁物品，高层怀疑有职员协助非法偷运。负责的调查员是陈锦鸿饰，亲自到惩教署深入调查，熟识内部运作方便找出犯人。他锁定其中一名犯人黄德斌，因他与女友袁彩云感情佳，入狱后又得到违禁品。最后揪出一名因欠下赌债的二级惩教助理阮兆祥，并当场在其身上搜获违禁品，并将涉案人等一网打尽。 真实个案：2001年，台北监狱受刑人勾结管理员在狱中贩毒被发现，一名吴姓受刑人涉嫌行贿狱政人员，利用手机，遥控外面的伙伴进行毒品交易。 2 单元个案：指工程公司利用监管漏洞来偷工减料，令不合格工程的四十一层楼宇严重沉降，为保安全，房署决定拆掉该楼宇。 真实个案：轰动一时的1999年沙田居屋愉翠苑短桩案，其时桩柱公司利用监管漏洞偷工减料，令两座楼宇严重沉降，最终房署需拆卸楼宇，而违法者最终也被绳之于法，和2004的《短桩》差不多。 3 单元个案：在廉政公署处理一宗诬告贪污案时，揭发另一宗指地产富商与银行高级职员非法勾结的亿万商诈骗案。 真实个案：香港500亿洗黑钱案。2001年，香港廉政公署宣布成功捣破了香港有史以来最庞大的跨境“洗黑钱”集团。廉署估计，这个集团至少已运作了5年，“洗黑钱”金额高达500亿港元。 4 单元个案：廉政公署收到3宗投诉，指高级警务人员收受利益包庇色情场所，展开调查后，揭发公职人员的失当行为，法庭以“以权谋私”的定罪因素作清晰阐释，此案便是将早年高级警司冼锦华一案变成内容，这集由陈国邦饰演高级警务人员，其他演员有惠英红及苗侨伟。 真实个案：有点类似改编自2003年香港高级警司冼锦华一案，涉嫌收受贿赂（包括免费性服务），以包庇色情场所，并在警方采取的“扫荡”行动前向黑帮组织通风报信。 5 单元个案：九铁职员利用火车货卡，进行走私活动。由于货运系统即将全面计算机化，廉署只有一个月的时间进行调查，刻不容缓。为查出犯罪者，廉署调查员混入货运调度部工作，执行拘捕行动。 真实个案：其实早在2006年，违法分子曾在深圳与香港之间打通地道进行走私，在深港边界线的民宅设点，挖地道连接贯穿深港的下水道，走私电子产品。
高开（秦沛 饰）本是智勇双全的新扎警察，自妻子不幸去世后，毅然放弃了除暴安良的理想，调往银乐队，以便更好照顾四个女儿。时光荏苒，如今大妹玉怡早已长大嫁人，却势利刁蛮，嫌弃丈夫杰佬工作低下，处处不如自己；二妹佩怡（陈慧珊 饰）则与男友ken合力发展事业，爱情长跑多年，却看不出结果；三妹宝怡（郭羡妮 饰）学历高，又在报社担任要职，于是对男友的拣选未免挑剔，很难认真发展下去；小妹翠怡（胡杏儿 饰）正在读大学，然而如同所有青春期的少女一样，放浪形骸，成绩欠佳。这四个女儿各有各的问题，而可怜天下父母心，看高开如何陪伴女儿共同经历人生的每一个阶段。
天光（郭晋安 饰）是重案组的CID，为人刚直不阿黑白分明。在追查一宗连环杀人案时，发现疑凶竟是二十年前从父亲手上逃脱的犯人。天光父亲大河（许绍雄 饰）是一名资质平庸的警察，且粗心大意不思上进，不仅让罪犯逃走，更是死在妓女床上，让天光母子蒙受巨大屈辱。以写作实况小说知名的作家高珊（陈慧珊 饰）此次亦追踪着天光手上的案件，二人对案件的不同理解造成摩擦，纷纷竞逐真相。 一日，天光发现父亲的旧电话神奇响起，对方声称自己是警察，只是所说所讲都停留在八十年代。细问起才发现那竟是二十年前的父亲大河！二人合作无间，跨越两个时空，共同追查真凶。
方谨昌（万梓良 饰）自由成长在穷苦的家庭之中，但心存高远志向的他并没有因为自己的出生卑微就自暴自弃。成年之后，方谨昌经过不懈努力，终于达成了自己的理想，获得了晋升成为了警督。与此同时，他与女友谢月明（刘嘉玲 饰）也即将踏入婚姻的殿堂。 一个名叫钟伟舜（吴启华 饰）的男人闯入了方谨昌的生活之中，他是方谨昌失散多年的弟弟。和方谨昌的正直善良不同，钟伟舜是一名不学无术的纨绔子弟，他不仅玩弄了方学宁（周海媚 饰）的感情致其自杀，甚至为了向上爬而不惜使出了弑亲的残忍手段。为了得到更多的金钱和权利，钟伟舜热烈的追求着香港首富之女宋楚翘（郑裕玲 饰），可是宋楚翘不仅不将他放在眼里，还和方谨昌关系亲密。将这一切看在眼里的钟伟舜内心里燃起了妒忌的黑色火焰。
赵抱石（陈启泰 饰）是一位精明强干的律师，某日，身世神秘的女子区学儿（张可颐 饰）找到了他，希望他能够为自己辩护。区学儿被卷入了一宗背景十分复杂的遗产争夺战之中，情况不容乐观，而区学儿似乎十分倾心于赵抱石，于有意无意之中向他放电，这令已经结了婚的赵抱石心中十分难耐。 原来，这所有的一切都是区学儿一手设计的阴谋，她勾引赵抱石不过是为了报复赵抱石的妻子周芷珊（苏玉华 饰）。最终，区学儿的阴谋得逞了，赵抱石彻底坠入了情网，直到此时，区学儿才惊觉自己亦深深的爱上了正直勇敢的赵抱石。关家乐（潘志文 饰）是区学儿曾经的情人，他的刑满释放给区学儿带来了不小的麻烦。
